Influencia de las condiciones de la cultura en el crecimiento de Escherichia Coli

El USO DE E. coli para producir medicamentos es un método biológico. Es decir, el uso de tecnología de bioingeniería para transferir genes extraños a E. coli, fermentación y cultivo para la expresión, centrifugación para recolectar las bacterias y luego usar una solución específica para romper las bacterias y recolectarlas. La proteína diana se convierte en medicina después de algún procesamiento posterior.

1. temperatura de la cultura

Los experimentos muestran que la temperatura de cultivo óptima está dentro del rango de 35 ~ 40 ℃, y la densidad celular aumenta con el aumento de la temperatura, lo que es consistente con las características de crecimiento general de E. coli. Sin embargo, la tasa de crecimiento es más rápida a 37 ℃ ~ 38 ℃, y el crecimiento posterior es relativamente plano. Combinando las características generales del cultivo de E. coli y la influencia cruzada de la temperatura y otros factores que influyen, la temperatura del cultivo se fijó a 37,5 °C en el experimento.

2. Valor de pH

Después de cultivar E. coli durante 18h con diferentes valores de pH, los resultados de la prueba muestran que el valor de pH de 8,0 no tiene un efecto significativo sobre la densidad celular, Y el valor de pH es demasiado bajo o demasiado alto para lograr buenos resultados. Cuando el valor de pH es 7,5, la densidad celular es relativamente más alta y su OD600 nm alcanza 3,25.

3. La influencia del oxígeno disuelto en el crecimiento de bacterias

De diferente índice de acuerdo con el oxígeno disuelto en el fermentador, se obtuvo la densidad celular del sistema de fermentación cuando se cultivó durante 18 horas. Los resultados experimentales muestran que la densidad celular aumenta continuamente con el aumento en el índice de oxígeno disuelto, pero la densidad celular aumenta lentamente después de la 50%.

4. Influencia de la cantidad de inoculación

La Optimización de diferentes cantidades de inoculación puede tener un mayor impacto en el crecimiento de bacterias. De 3% a 4%, el estado de crecimiento de las bacterias es mejor que el de cantidades de inoculación demasiado bajas o altas. Las cantidades de inoculación demasiado bajas harán que el crecimiento de bacterias sea demasiado lento. Una cantidad demasiado alta de inóculo consumirá una gran cantidad de nutrientes en la etapa inicial y causará un desperdicio de cepas de semillas, por lo que se utilizó 4% cantidad de inóculo en el experimento.

5. Determinación del tiempo de la cultura

Los resultados experimentales de diferentes tiempos de incubación mostraron que las bacterias aumentaron en múltiplos de 12 a 18 horas y luego crecieron lentamente. Muestra que en la última etapa del crecimiento exponencial, la energía de las bacterias no es adecuada para la reproducción masiva, pero se ve afectada por los metabolitos. Por lo tanto, para acortar el ciclo de crecimiento, la cosecha de bacterias debe ser en el período de crecimiento exponencial tardío, es decir, 18h.

6. Determinación de la velocidad

La velocidad de la incubadora de agitación aumenta con el aumento de oxígeno disuelto y la densidad celular aumenta en consecuencia. La tasa de crecimiento de la densidad celular es más rápida en 100 ~ 200r/min, y relativamente lenta en 200 ~ 300r/min, indicando que la velocidad de 200r/min ya puede promover la disolución del oxígeno en el aire. Teniendo en cuenta que el aumento de la velocidad puede producir efectos adversos como la espuma, por lo que la mejor velocidad adoptada en la prueba es 200r/min.

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