Separación y cultivo de microorganismos

! Separación y cultivo

Los microorganismos existen en un estado mixto en la naturaleza. Para obtener las cepas deseadas, deben separarse de ellas. Si se contamina accidentalmente cuando se conserva, debe purificarse. Hay muchos métodos para la separación y purificación de microorganismos, pero el principio básico es similar. Es decir, la muestra a separar se diluye en cierta medida, y las células (o esporas) del microorganismo se mantienen en un estado disperso tanto como sea posible, Y luego se convierten en una sola colonia pura. Sin embargo, el trabajo anterior es inseparable del proceso de inoculación, que es transferir un microorganismo a otro medio esterilizado.

Material y herramienta de clasificación de inoculación microbiológica:

Incubadora de temperatura constante, anillo de inoculación, varilla de vidrio, pipeta, lámpara de alcohol, medio de cultivo, E. coli, Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, levadura, etc.

Método de operación de inoculación:

1. Inoculación inclinada (conectar Staphylococcus aureus)

Antes de operar, límpiese las manos con alcohol 75% y encienda la lámpara de alcohol después de que el alcohol se volatilice. Sostenga el tubo de deformación y la superficie inclinada entre el pulgar izquierdo y los otros cuatro dedos, de modo que la superficie inclinada y el lado con la tensión estén orientados hacia arriba y en una posición horizontal. Primero, gire la tensión y el tampón de la pendiente para que sea fácil de extraer al inocular. Sostenga el anillo de inoculación en su mano izquierda (como sostener un bolígrafo), esteriliza primero el extremo del anillo de la llama y luego esterilizarlo extendiéndose hacia el resto del tubo de ensayo. Use el dedo anular, el dedo meñique y la palma de su mano derecha para sacar el tubo de germen y el tapón de algodón o la tapa del tubo de ensayo inclinado al mismo tiempo, Y luego esterilizar lentamente la boca del tubo de ensayo (no se queme demasiado caliente). Extienda el anillo de inoculación quemado en el tubo de semilla, póngase en contacto con el anillo de inoculación en la pared interior del tubo de ensayo o el medio sin musgo, déjelo enfriar lo suficiente, luego raspe suavemente un poco de musgo y luego sacarlo del tubo Anillo de vacunación. Extienda rápidamente el anillo inoculado con bacterias en otro tubo de ensayo que se conectará. Haga una forma "Z" desde la parte inferior de la pendiente hacia arriba y hacia abajo densamente. A veces también es posible usar una aguja de inoculación para tirar de una línea en el Centro del Medio para la inoculación oblicua, a fin de observar las características de crecimiento de las bacterias. Una vez completada la inoculación, se retira el bucle de inoculación y se inserta el tapón de algodón. Esterilizar el anillo de vacunación. Baja el bucle de inoculación y aprieta el tapón de algodón.

2. inoculación líquida

Conecte el medio inclinado al medio líquido. Este método se utiliza para observar las características de crecimiento de las bacterias y la medición de la reacción bioquímica. El método de operación es el mismo que antes, pero la boca del tubo de ensayo está inclinada hacia arriba, para evitar que el fluido del cultivo fluya y conecte las bacterias, inocular Frote el anillo y la pared interna del tubo varias veces para lavar las bacterias en el anillo. Después de la inoculación, se inserta un tapón de algodón y se golpea suavemente el tubo de ensayo en la palma de la mano para dispersar completamente las bacterias. Inocule el medio líquido del medio líquido. Cuando La CEPA sea líquida, use una pipeta o cuentagotas estéril además del anillo de inoculación. Al inocular, simplemente saque el tapón de algodón junto a la llama, pase la boca del tubo a través de la llama, Use una pipeta estéril para succionar la solución bacteriana en la solución de cultivo, Y agitarlo uniformemente.

3. inoculación de la placa

Marque y propague las bacterias en el plato. Inoculación en línea cruzada Véase el método de línea cruzada separada. Difundir e inoculación Inyectar la solución bacteriana en la placa con una pipeta estéril, y cubrir uniformemente la superficie de la placa con una varilla de vidrio esterilizado.

4. Vacunación

Inocule las bacterias en el medio de cultivo profundo sólido. Este método se utiliza para inocular bacterias anaeróbicas u observar el rendimiento fisiológico al identificar bacterias. El método de operación es el mismo que el anterior, pero la aguja de inoculación utilizada debe ser recta. Pinche la aguja de inoculación desde el centro del medio de cultivo hasta que esté cerca de la parte inferior del tubo, pero no penetre, y luego extraiga lentamente la ruta de perforación original.

El método de la operación de separación de la DE LA S. C.:

1. Dilución método de separación

Dispersar la muestra separada al mínimo mediante dilución continua, luego extraer una cierta cantidad en la placa y mezclarla con el medio de agar que sea adecuado para derretir, de modo que las bacterias dispersas se fijen en su lugar para formar una sola colonia. Escherichia coli o levadura se prepara con agua estéril como una suspensión bacteriana. Tome varios tubos de ensayo estériles, cada uno con 9ml de agua estéril. Pipeta 1ml de la suspensión bacteriana preparada y colóquelo en el primer tubo de ensayo que contiene 9ml de agua estéril, de modo que se diluya 10 veces, que es 10-2. Dibuje 1ml del primer tubo de ensayo (10-2) y lo inyecte en el segundo tubo de ensayo que contiene agua estéril, de modo que se diluya 100 veces, que es 10-2. Operar De la misma manera hasta diluir a 10-5-10-6. Dibuje con precisión 0,2 ml de la solución bacteriana de cada dilución a 10-5-10-6 y agrégelo al plato estéril vacío numerado. Repita la misma dilución para hacer tres platos. Vierta el medio de agar que se ha derretido y enfriado a 45 en cada una de las placas mencionadas anteriormente, gire suavemente para mezclar bien el medio y la suspensión bacteriana, después de la solidificación. ponerlo en una incubadora de 37 o 38 grados e incubar durante 24-48 horas, observe El crecimiento y distribución de las colonias en la placa.

2. Método de separación de Scribe de lecho plano

El método de separación de rayas de placa es un método para separar los microorganismos dividiendo el anillo de inoculación en la superficie del medio de la placa por Zonificación. El principio es diluir la muestra microbiana "de un punto a otro" en la superficie del medio sólido varias veces para lograr el propósito de la separación. Vierta el plato Disolver el extracto de ternera peptona agar medio, vierta el plato y déjelo reposar horizontalmente hasta que se frene. Queme el anillo de inoculación en la llama de la lámpara de alcohol y espere a que se enfríe, tome un líquido de inoculación mixto de Staphylococcus aureus y Escherichia coli. Sostenga la placa de agar en la mano izquierda y levante ligeramente la tapa, mientras se acerca a la llama. Sostenga el anillo de inoculación a la derecha y extienda hacia el plato. Haga una línea de escriba en un área de la placa. El anillo de inoculación está a 30-40 ° de la superficie de la placa. Toque suavemente el ángulo y use la fuerza de la muñeca para deslizarse ligeramente sobre la superficie. No rayar ni incrustar la superficie de la tableta en la base. Quema la copa de inoculación para matar el líquido bacteriano restante en el anillo de inoculación. Después de enfriar, extienda el anillo de inoculación en el plato. Después de hacer un pequeño contacto con la línea cruzada en la primera área, gira 90 °. Las dos zonas continúan atravesadas. Después del marcado, inocule la copa de inoculación, después del enfriamiento, use el mismo método para dibujar líneas en otras áreas. Después de que todas las líneas estén marcadas, use un crayón especial en el fondo del plato para indicar la tensión, la fecha, el Grupo y el nombre. Coloque toda la placa de Petri boca abajo y colóquela en una incubadora de temperatura constante. 37 Después de 24-48 horas de cultivo, saque y observe. Preste atención a las características del interruptor de Colonia, tamaño, color, borde, estructura de superficie, transparencia, etc.

A' Precauciones:

1. La sala de inoculación debe mantenerse limpia, frote las encimeras y paredes con jabón líquido de fenol pulverizado y fumigar regularmente con ácido láctico o formaldehído. Antes de cada uso, debe ser esterilizado por la lámpara UV. Compruebe regularmente la esterilidad de la sala de inoculación. Antes de ingresar a la sala de vacunación, primero se debe hacer la higiene personal, y los zapatos de trabajo, los sombreros, la ropa de trabajo y las máscaras deben reemplazarse en la sala de amortiguadores. La ropa de trabajo, los zapatos de trabajo y las máscaras solo pueden usarse en la sala de vacunación. No está permitido ir a otros lugares y debe reemplazarse y desinfectarse con regularidad. Los tubos de ensayo, triángulos y botellas inoculados deben marcarse con el nombre y la fecha del medio de cultivo y la CEPA. Todos los artículos que se trasladen a la sala de inoculación deben limpiarse con alcohol 70% en la sala de amortiguación. Antes de la inoculación, esterilizar ambas manos con alcohol 70% o Xinjieer, no dejar la llama de la lámpara de alcohol durante la operación; el tampón no se coloca al azar; las herramientas de inoculación necesitan ser esterilizadas a la llama antes y después de su uso.

2. La incubadora debe limpiarse y desinfectarse con frecuencia.